Shaanxi BLOOM Tech co, Ltd se youn nan manifaktirè yo ak founisè ki pi eksperyans nan proteinase k poud cas 39450-01-6 nan Lachin. Byenveni nan an gwo en meyè kalite proteinase k poud cas 39450-01-6 pou vann isit la nan faktori nou. Bon sèvis ak pri rezonab ki disponib.
Proteinase K poudse yon pwoteaz serin ki pa-espesifik ki trè efikas, lajman ki itilize nan byoloji molekilè ak byochimik, sitou pou degrade pwoteyin ak retire pwoteyin ki kontamine nan preparasyon asid nikleyik. Li sòti nan chanpiyon Engyodontium album (ansyen Tritirachium album) epi li kenbe aktivite li sou yon pakèt tanperati (20-60 degre) ak pH (4-12), menm lè enkubasyon nan yon solisyon ki gen SDS (0.5-1%) oswa ure (4M) nan kondisyon denaturasyon.
Anzim la efikasman kraze yon pakèt pwoteyin, ki gen ladan RNase ak DNase, lè li koupe lyezon peptide (preferans idrolize tèminal carboxyl la nan asid amine alifatik / aromat), epi se poutèt sa yo itilize pou retire nukleaz nan ekstraksyon ADN / RNA asire entegrite asid nikleyè. Anplis de sa, li se souvan itilize nan dijesyon tisi (egzanp, parafin-echantiyon entegre), liz selil, ak etid pwoteomik.
Pwoteinaz K poud anjeneral apwovizyone nan fòm liyofilize, ki trè estab (-20 degre pou depo alontèm) epi li bezwen fonn nan yon tanpon (egzanp Tris-HCl, EDTA) anvan ou itilize. Aktivite li depann de Ca²⁺, men ajan chelating tankou EDTA sèlman pasyèlman anpeche aktivite anzim yo. Oto-degradasyon bezwen evite pandan manyen ak inaktivasyon chalè a 65 degre rekòmande. Akòz kapasite pisan idrolize pwoteyin li yo, li nesesè pou fè atansyon pou evite kontak po oswa manbràn mikez.
Proteinase k poud, konnen tou kòm Proteinase K oswa EC 3.4.21.14, se yon serine proteaz izole ak pirifye nan album Tritirachium Limber. Depi premye izòlman li pa Wolfgang Ebeling et al. an 1974, proteinase K te lajman itilize nan byochimik, byoloji molekilè, medikaman, ak endistri akòz gwo aktivite li yo ak espesifik substra laj.
Aplikasyon nan byochimik ak byoloji molekilè
Nan pwosesis pou fè ekstraksyon ADN ak RNA, fonksyon prensipal la nan proteinaz K se degrade pwoteyin ki mare nan asid nikleyik, sa ki pèmèt ADN oswa RNA yo dwe gratis nan solisyon pou ekstraksyon ki vin apre ak pirifikasyon. Akòz estabilite li yo ak gwo aktivite nan ajan denaturasyon tankou ure ak SDS, proteinase K se souvan itilize pou izòlman nan plasmid oswa ADN jenomik ak RNA.
proteinase K ka anpeche aktivite RNAse ak pwoteje RNA kont degradasyon.
1. ADN ak RNA ekstraksyon
Ekstraksyon ADN: Pwoteaz K ka idrolize iston ki mare ak ADN, sa ki pèmèt ADN disosye nan solisyon. Imedyatman, enpurte yo te retire atravè divès metòd tankou ekstraksyon klowofòm fenol, presipitasyon etanòl, elatriye, ak ADN pirifye yo te kolekte.
Ekstraksyon RNA: Pandan pwosesis ekstraksyon RNA, anzim RNA yo souvan prezan nan anviwònman an, epi sistèm echantiyon an li menm ka gen ladan tou anzim RNA, ki fè RNA trè sansib a degradasyon. Ajoute yon ti kantite
2. In situ hybridization teknoloji
Nan teknoloji ibridasyon in situ, proteinase K yo souvan itilize pou pwosesis pre ibridizasyon pou dijere pwoteyin ki antoure ADN sib la, ogmante chans pou pwofonde lyezon asid nikleyik sib la, epi amelyore siyal ibridizasyon an. Sepandan, li ta dwe remake ke lè konsantrasyon nan proteinaz K twò wo, tan dijesyon an twò lontan, oswa tanperati enkubasyon an twò wo, li ka lakòz domaj nan estrikti selil la, ki mennen ale nan koule nan seksyon tisi ak disparisyon nan nwayo selil, kidonk afekte rezilta ibridizasyon yo. Se poutèt sa, nan aplikasyon pratik, li nesesè estrikteman kontwole konsantrasyon an ak tan tretman nan proteinase K.
3. Inaktivasyon viris ak dezenfeksyon
Pwoteaz K, akòz aktivite pwoteolitik fò li yo, ka itilize pou inaktivasyon viris ak dezenfeksyon. Rechèch yo montre ke trete dlo pi ak dlo ize domestik ak yon sèten konsantrasyon nan proteinase K ka efektivman inaktive viris. Pwoteaz K, kòm yon dezenfektan ki inaktive viris, ka diminye domaj potansyèl ki te koze pa dezenfektan chimik oksidatif konvansyonèl yo nan kò imen an, ak pwodiksyon li yo ak transpò yo san danje san polisyon anviwònman irevokabl.
4. Western blotting ak elektwoforèz batman kè
Protease K te lajman itilize tou nan preparasyon ADN kwomozòm pou elektwoforèz enpulsyonèl, Western blotting, ak lòt eksperyans. Nan eksperyans Western blot, yo ka itilize proteinaz K pou retire pwoteyin ki pa-espesifik nan echantiyon an, pou amelyore espesifik ak sansiblite blot la. Nan eksperyans elektwoforèz batman kè, proteinase K ka degrade enpurte pwoteyin nan echantiyon ADN ak amelyore efikasite elektwoforèz.
5. Pwoteyin deteksyon ak idantifikasyon
Proteinase k poudka itilize tou pou deteksyon ak idantifikasyon sèten pwoteyin. Pou egzanp, nan etid ansefalopati sponjifòm transmissible (TSE), proteinase K ka itilize pou dijere pwoteyin nan echantiyon tisi nan sèvo, ak idantifye prezans nan pwoteyin priyon pa detekte rezistans nan priyon patojèn nan proteinaz K. Anplis de sa, proteinase K ka itilize tou pou eksperyans tankou detèmine lokalizasyon nan manbràn anzim yo nan selil anzim yo. andotoksin (tankou lizozim ak ribonukleaz A).
Aplikasyon nan Medsin ak endistri
Itilizasyon klinik: Protease K gen sèten valè medsin nan medikaman. Pou egzanp, trete endijesyon ak pwoteaz gastric, trete bwonchit ak proteaz asid, trete vaskulit ak elastase, elatriye Anplis de sa, trypsin, chymotrypsin, elatriye yo tou souvan itilize pou pirifye blesi purulan chirijikal ak tretman adezyon seroz pleural.
Deteksyon ak dyagnostik viris: Protease K tou gen aplikasyon potansyèl nan deteksyon ak dyagnostik viris. Lè yo dijere pwoteyin yo nan echantiyon viris la ak ekspoze asid nikleyik viris la, li bay konvenyans pou tès asid nikleyik ki vin apre.
2. Endistriyèl sektè
Endistri kwi: Protease K yo itilize nan endistri a kwi pou retire cheve ak ralantisman tretman, sa ki ka ekonomize tan ak amelyore kondisyon ijyèn travay.
Endistri twal: Protease K ka itilize nan endistri twal tankou degumming swa.
Endistri Manje: Protease K ka itilize nan endistri manje pou sansibilizasyon vyann, klarifikasyon alkòl, elatriye.
Detèjan: Anzim te ajoute detèjan lesiv se yon nouvo pwodwi nan detèjan. Detèjan lesiv ki gen proteaz alkalin ka retire tach san ak pousyè tè pwoteyin nan rad. Men, lè w ap itilize li, fè atansyon pou pa manyen po a pou evite domaje pwoteyin ki sou sifas po a ak lakòz reyaksyon alèjik tankou gratèl ak ekzema.
Pwa molekilè nan proteinase K se apeprè 28900 daltons (28.9 kDa), epi gen tou rapò literati nan 29.3 kDa. Sekans asid amine li yo ak estrikti espasyal twa -dimansyon yo sanble anpil ak subtilisin fanmi serine proteaz yo, men gen kèk karakteristik inik tou.
Estrikti kosyon disulfid: molekil Protease K gen lyezon disulfid, ki ogmante estabilite yo epi pèmèt yo kenbe aktivite sou yon ranje pH lajè ak kondisyon tanperati ki wo.
Sit obligatwa Ca ² ⁺:Proteinase k poudgen de sit obligatwa Ca ² ⁺, ki, byenke lwen sant aktif la, enpòtan anpil pou kenbe aktivite katalitik anzim la. Retire Ca ² ⁺ pral lakòz proteaz K pèdi apeprè 80% nan aktivite li, epi re-entwodwi Ca ² ⁺ ka sèlman pasyèlman retabli aktivite li.
Triyad katalitik: Proteaz K gen yon triyad katalitik Asp{0}}His69-Ser224, ki se yon estrikti kle pou aktivite idrolitik li.
Mekanis aksyon
Pwoteaz K ka idrolize preferans ester ak peptides lyezon adjasan a tèminal C-asid amine idrofob, asid amine ki gen souf-, ak asid amine aromat, idrolize pwoteyin nan peptides kout. Mekanis aksyon li yo sitou gen ladan etap sa yo:
Substra anzim obligatwa: Apre proteaz K melanje ak substra a, substra a mare nan sit la aktif nan anzim nan, fòme yon konplèks substra anzim.
Reyaksyon katalitik: Anba aksyon sit aktif la, kosyon peptide substra a idrolize pou fòme yon pwodwi ki separe ak anzim la.
Efè degradasyon fò nan proteaz K fè li yon reyaktif kle nan divès reyaksyon byochimik, espesyalman nan pwosesis ekstraksyon ADN ak RNA. Protease K ka efektivman degrade pwoteyin ki mare nan asid nikleyik, lage asid nikleyik, ak anpeche aktivite a nan nukleaz, diminye degradasyon nan asid nikleyik pandan ekstraksyon.
Depo ak metòd itilizasyon
1. Save metòd
Pwoteaz K ta dwe estoke nan yon frijidè a -20 degre pou evite konjelasyon repete ak dekonjle. Si solisyon an presipite, li pa ka itilize ankò. Lè w ap prepare poud ki seche friz-proteinaz K, li nesesè pou ajoute yon pwoteksyon siye jele-pou kenbe yon nivo solid ki wo. Sepandan, proteinase K gen tandans rasanble ak fòme presipite nan konsantrasyon 20mg / mL oswa pi wo, ki poze yon defi enpòtan pou segondè kontni solid friz-seche.
2. Enstriksyon pou itilize
Lè w ap itilize proteinaz K, li nesesè pou prepare yon solisyon konsantrasyon apwopriye selon kondisyon eksperimantal. Anjeneral, konsantrasyon k ap travay nan proteinaz K se 0.05-0.2mg / mL. Nan eksperyans ekstraksyon ADN ak RNA, èkstraksyon yon echantiyon mande pou apeprè 0.1mg nan proteinaz K. Pou amelyore efikasite nan ekstraksyon asid nikleyik, dòz la nan proteinase K ka yon fason ki apwopriye ogmante. Lè w ap itilize proteinaz K pou ibridizasyon in situ, Western blotting, ak lòt eksperyans, li nesesè pou kontwole estrikteman konsantrasyon li yo ak tan pwosesis pou evite domaje estrikti selil la.
Proteinase k poud, kòm yon trè aktif ak substrate espesifik serin proteaz, gen yon pakèt aplikasyon nan byochimik, byoloji molekilè, medikaman, ak endistri. Li ka degrade pwoteyin ki mare ak asid nikleyik epi lage asid nikleyik; Ogmante opòtinite pou sond yo mare nan vize asid nikleyik nan teknoloji ibridizasyon in situ; Itilize pou inaktivasyon viris ak dezenfeksyon; Retire enpurte pwoteyin nan Western blot ak eksperyans elektwoforèz batman kè; Gen valè medsin nan domèn medikaman; Itilize nan jaden endistriyèl tankou pwosesis kwi, endistri twal, endistri manje, ak fabrikasyon detèjan. Sepandan, lè w ap itilize proteinase K, yo ta dwe peye atansyon sou metòd depo li yo ak kondisyon itilizasyon pou asire estabilite ak aktivite li yo.
reyaksyon negatif
Proteinase K se yon gwo -serin proteaz ki itilize lajman nan byoloji molekilè, byochimik, ak rechèch medikal akòz pwopriyete inik anzimatik li yo ak estabilite. Kòm yon fòm poud seche friz-, Proteinase K Powder jwe yon wòl enpòtan nan eksperyans tankou ekstraksyon asid nikleyik, dijesyon pwoteyin, ak omojeneizasyon tisi. Sepandan, itilizasyon nenpòt reyaktif byolojik vini ak risk potansyèl, ak reyaksyon negatif li yo ka enplike sante operatè yo ak sekirite anviwònman eksperimantal la.
Reyaksyon alèjik
Manifestasyon klinik yo
Proteinase K ka deklanche reyaksyon ipèsansibilite tip I, ak sentòm ki gen ladan:
Reyaksyon po: gratèl, gratèl, urtikè, eritem, ak nan ka grav, èdèm vaskilè ka rive.
Sentòm respiratwa yo: tous, souf anlè, difikilte pou respire, ka deklanche atak opresyon.
Sentòm sistemik: vètij, sere nan pwatrin, doulè nan pwatrin, doulè nan misk, woujè, ak nan ka ra, chòk anafilaktik ka rive.
Mekanis ensidan an
Proteinase K, kòm yon pwoteyin eterològ, ka rekonèt pa sistèm iminitè a kòm yon antijèn, ankouraje selil B yo pwodwi antikò IgE espesifik. Lè yon moun vin an kontak ankò, IgE mare nan reseptè sou sifas selil mast yo, sa ki lakòz reyaksyon degranulasyon ak divilge medyatè enflamatwa tankou histamine ak leukotrienes, ki mennen nan sentòm alèjik.
Faktè ki enfliyanse
Sansiblite endividyèl: Sensibilite jenetik ak yon istwa alèji (tankou opresyon ak ekzema) ogmante risk la.
Wout ekspoze: rale nan patikil poud oswa kontak dirèk po gen plis chans lakòz alèji.
Dòz ak frekans: Itilizasyon alontèm oswa gwo -dòz ka ogmante pwobabilite pou sansibilizasyon.
Iritasyon po ak mikoz
Manifestasyon klinik yo
Iritasyon po: Ekspozisyon alontèm ka lakòz woujè, sechrès, ekaye, e menm dèrmatit kontak.
Iritasyon nan je: Poud k ap antre nan je yo ka lakòz doulè boule, chire, ak konjesyon konjonktiv.
Mekanis ensidan an
Aktivite pwoteolitik Proteinase K ka deranje baryè korne po a, pandan y ap friksyon fizik patikil poud yo entansifye iritasyon. Konjonktiv la gen plis sansib a domaj chimik akòz mukoza mens li yo ak veso sangen abondan.
Baj popilè: proteinase k poud cas 39450-01-6, Swèd, manifaktirè, faktori, wholesale, achte, pri, esansyèl, pou vann