Gonadorelin Acetate Peptide

Sentèz faz likid piti piti konekte asid amine atravè yon estrateji gwoup pwoteksyon nan solisyon, apwopriye pou sentèz chèn polypeptide kout ki gen estrikti espesyal tankou lyezon disulfid. Nwayo a manti nan seleksyon an ak retire sekans nan gwoup pwoteksyon pou fè pou evite reyaksyon segondè.

Depwoteksyon ak pirifikasyon:
Sèvi ak TFA pou retire gwoup Boc yo ak piridin pou retire gwoup Fmoc yo, yo te jwenn peptide lineyè PyrHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGlyNH2.
Pirifikasyon pa HPLC ak friz-seche pou jwenn Gonarelin brit.

Avantaj: Kontwòl egzat nan kondisyon reyaksyon, apwopriye pou sentèz chèn peptide konplèks; Pa bezwen transpòtè faz solid, diminye depans yo.
Limit: Etap yo ankonbran epi yo mande pou pirifikasyon miltip; Entèmedyè reyaksyon yo bezwen pirifye pou pwolonje sik pwodiksyon an.

Yon etid sèten te itilize metòd sentèz likid -faz pou optimize fòmil reyaktif koupe a (88% TFA+5% sulfid aniz+5% dlo+2% etanedithiol), ki te ogmante pwodiksyon an brit a 91.8% ak pite pwodwi a plis pase 99%.

Fòmil molekilè Gonarelin Acetate se C ₅₇ H ₇₉ N ₁₇ O ₁₅, ak yon pwa molekilè 1242.36 Da. Estrikti debaz li se yon chèn dekapeptide, ki gen ladann sekans asid amine sa yo:

5-Oxopropyl-L-Histoyl-L-triptofan{-L-triptofan-L-triptofan{{1 0}}L-tirosyl-glizil{-L-leucyl-L-arginil-L-prolyl-glycinamide.
Nan estrikti sa a, premye 5-oxoproline (asid piroglutamik) fòme yon estrikti siklik, amelyore estabilite molekilè; Glisin (Gly) nan pozisyon 6 ak glizinamid (Gly-NH ₂) nan pozisyon 10 se segman fleksib ki dote molekil la ak fleksibilite konformasyon; Twazyèm triptofan (Trp) ak senkyèm tirozin (Tyr) genyen bag aromat epi yo ka patisipe nan entèraksyon entèmolekilè atravè π - π anpile.
Entwodiksyon fòm acetate (CH3 COO ⁻) pa sèlman amelyore solubility nan dwòg la (avèk yon solubilite dlo ki rive jiska 25 mg / mL), men tou, mare nan gwoup amine oswa carboxyl nan chèn nan atravè lyezon iyonik, fòme yon estrikti sèl ki estab ak diminye risk pou degradasyon chèn peptide pandan depo.

Kapasite idwoksil, amine, gwoup carboxyl pou fòme lyezon idwojèn ak molekil dlo mande pou depo nan yon anviwònman sèk pou fè pou evite clumping oswa degradasyon.
Solibilite:
Konpoze sa a gen yon solubility segondè nan dlo (25 mg / mL), se yon ti kras idrosolubl nan metanol, epi li ka konplètman fonn nan 1% solisyon asid acetic. Solibilite li yo siyifikativman afekte pa pH: anba kondisyon asid (tankou 1% asid acetic), carboxyl protonation diminye repouse elektwostatik entèmolekilè ak ankouraje yap divòse; Nan anviwònman net oswa alkalin, deprotonasyon nan gwoup karboksil ka deklanche agrégation entèmolekilè, ki mennen nan yon diminisyon nan solubility.

Pwen k ap fonn ak estabilite tèmik:
Done eksperimantal yo montre ke pwen fizyon an pi wo pase 155 degre C (dekonpozisyon), ki endike estabilite tèmik fò. Sepandan, tanperati ki wo ka lakòz idroliz peptide kosyon oswa oksidasyon chèn asid amine, kidonk depo aktyèl la bezwen kontwole nan seri a nan -20 degre C a 8 degre C pou retade degradasyon.

Karakteristik espektak:
Spectre absòpsyon UV la montre yon maksimòm absòpsyon nan 278 nm, ki koresponn ak sistèm konjige bag aromat triptofan ak tirozin. Karakteristik sa a ka itilize pou analiz quantitative (tankou detèminasyon espektrofotometrik nan kontni), oswa pou konpare pite ak estanda referans atravè chromatografi kouch mens (TLC).

ESTABILITE HYDROLYTIC
Relativman ki estab nan kondisyon asid oswa net, men tendans idroliz kosyon peptide nan anviwònman alkalin. Pou egzanp, anba aksyon an nan baz fò (tankou NaOH), kosyon an peptide ant glisin nan 6yèm ak leucin nan 7yèm ka kraze, jenere fragman peptide kout. Anplis de sa, bag la endol nan triptofan twazyèm lan gen tandans ouvèti bag nan kondisyon limyè oswa oksidatif, ki mennen nan pèt nan aktivite dwòg.

Nan prezans oksijèn oswa radikal gratis, gwoup fonksyonèl sa yo ka sibi reyaksyon oksidasyon, jenere peroksid oswa dérivés hydroxyl, ki an vire deklanche chèn degradasyon. Se poutèt sa, antioksidan (tankou vitamin C) yo souvan ajoute nan fòmilasyon amelyore estabilite.

Limyè estabilite
Sansiblite nan limyè, espesyalman limyè iltravyolèt (200-400 nm), ka dirèkteman deranje sistèm nan konjige nan triptofan oswa endirèkteman deklanche degradasyon oksidatif nan jenerasyon an nan radikal gratis. Piki klinik yo ta dwe pake nan boutèy an vè mawon epi estoke lwen limyè.

Aktivite obligatwa reseptè
Lè yo lye ak gwo afinite ak reseptè GnRH nan glann pitwitè antérieure a atravè estrikti dis li yo, siyal entraselilè (tankou chemen cAMP/PKA) deklanche, ki mennen ale nan liberasyon gonadotropin (FSH, LH). Aktivite obligatwa li depann de:
Konplemantasyon ant estrikti siklik premye 5-oxoproline la ak pòch reseptè a;
Entèraksyon π - π ant bag aromat twazyèm triptofan ak rejyon idrofob reseptè a;
Se chaj la pozitif nan 8yèm arjinin nan elektwostatik atire rezidi asid nan reseptè a.

Mekanis bifazik
Lè yo administre kontinyèlman nan kout tèm, li ankouraje liberasyon FSH / LH nan glann pitwitèr ak ogmante nivo òmòn sèks yo; Administrasyon alontèm mennen nan anpèchman nan sekresyon FSH / LH akòz desensibilizasyon reseptè, finalman diminye òmòn sèks nan nivo kastrasyon. Karakteristik sa a fè li yon altènativ a kastrasyon chirijikal nan tretman kansè pwostat, pandan y ap diminye risk pou konplikasyon chirijikal.

Pwodwi degradasyon polimòfik:
Pandan pwosesis metabolik nan kò a, divès metabolit yo ka pwodwi nan idroliz anzimatik (tankou aksyon peptidase) oswa degradasyon ki pa anzimatik (tankou oksidasyon). Pou egzanp, 6yèm glisin lan ka idrolize pou jenere yon fragman nèf peptide; Oksidasyon triptofan nan twazyèm pozisyon jenere dérivés hydroxyl. Aktivite metabolit sa yo dwe idantifye pa espektometri mas (LC-MS) oswa sonorite mayetik nikleyè (NMR) pou evalye sekirite yo.
Entèaksyon dwòg:
Lè yo itilize nan konbinezon ak dwòg ki gen iyon metal (tankou sèten antibyotik), solubility la oswa aktivite nangonadorelin acetate peptideka redwi akòz chelation. Anplis de sa, fòm sèl asid li yo ka sibi reyaksyon netralizasyon ak dwòg alkalin (tankou antihistamin), epi yo ta dwe evite piki melanje.