Dihydroethidium, CAS nimewo 104821-25-2, molekilè fòmil C21H21N3, ak yon pwa egzat molekilè nan 315.41, se yon konpoze enpòtan ak aplikasyon pou byolojik vaste. Li anjeneral parèt tankou yon poud amann cristalline sòti nan woz nan koulè wouj violèt. Sa a koulè inik fè li fasil yo rekonèt nan laboratwa a epi li bay yon background natirèl fliyoresan pou itilize li kòm yon sond fliyoresan. Nan rechèch chimik ak byolojik, li se souvan itilize kòm yon ankèt yo detekte espès oksijèn reyaktif, espesyalman nan deteksyon an nan anyon entranki superoksid, ki montre efikasite ekstrèmman wo. Dye sa a ka lib antre nan selil yo ak dezidrogenate yo fòme bromid etidyom. Sa a te sondaj lajman itilize nan selil NK ak kòm yon lank enpòtan pou idantifye pwopagasyon selil ak ipoksi nan timè.
|
|
|
|
Fòmil chimik |
C56H92O29 |
|
Mas egzak |
1229 |
|
Pwa molekilè |
1229 |
|
m/z |
1229 (100.0%), 1230 (60.6%), 1231 (18.0%), 1231 (6.0%), 1232 (3.6%), 1232 (3.5%), 1230 (1.1%), 1233 (1.1%), 1230 (1.1%) |
|
Analiz elemantè |
C, 54.71; H, 7.54; O, 37.74 |
Dihydroethidium, kòm yon sonde ble fliyoresan ki ka antre nan selil yo, jwe yon wòl enpòtan nan jaden yo nan byoloji ak medikaman. Pwopriyete inik fluoresans li yo pèmèt li detekte nivo yo nan anyon superoksid (O2-) nan selil yo, kidonk revele fòmil yo nan espès oksijèn reyaktif nan fizyoloji selilè ak patoloji.
1. D 'selil
Dihydroethylene, kòm yon pwofonde fliyoresan, ka antre nan selil yo ak mare nan ADN, émettant wouj fluoresans. Se poutèt sa, li se lajman ki itilize nan teknoloji D 'selil kontwole estati a redox nan selil nan reyèl - tan. Atravè ekipman tankou mikroskopi fluoresans oswa sitometri koule, chèchè yo ka obsève distribisyon an ak chanjman nan dihydroethylenediamine nan selil yo, kidonk konprann eta a redox nan selil nan eta fizyolojik oswa pathologie.
2. Redox Deteksyon Eta a
Pwopriyete yo fluoresans nan ethylene dihydrogen ingot fè li yon zouti ideyal pou detekte eta a redox. Nan selil yo, dihydroethylenediamine ka soksid pa anyon superoksid yo fòme ethylenediamine, ki Lè sa a, mare nan ADN ak emèt fluoresans wouj. Se poutèt sa, pa detekte entansite a fluoresans nan dihydroethylenediamin, nivo nan anyon entranki superoksid ka endirèkteman reflete, kidonk evalye estati a redox nan selil yo. Metòd deteksyon sa a gen avantaj ki genyen nan gwo sansiblite, espesifik, ak segondè - debi, bay yon zouti pwisan pou etidye chanjman yo dinamik nan estati redox selilè.
3. Rechèch timè
Dihydroethylene gen yon pakèt aplikasyon nan rechèch timè. Akòz nivo segondè redox nan selil timè, dihydroethylenediamine ka sèvi kòm yon makè timè efikas pou dyagnostik bonè ak evalyasyon ki ka geri nan timè. Anplis de sa, dihydroethylenediamine kapab tou itilize yo etidye pwosesis yo byolojik nan pwopagasyon selil timè, apoptoz, ak envazyon, bay endikasyon enpòtan pou revele fòmil yo nan ensidan timè ak devlopman.
4. Depistaj dwòg
Dihydroethylenediamine tou jwe yon wòl enpòtan nan tès depistaj dwòg. Anpil dwòg, pandan y ap fè egzèsis efè ki ka geri ou, tou gen yon enpak sou eta a redox nan selil yo. Se poutèt sa, pa detekte entansite a fluoresans nan dihydroethylenediamin, enpak la nan dwòg sou estati redox selilè ka evalye, ak potansyèl dwòg ki ka geri ou ka fè tès depistaj soti. Anplis de sa, dihydroethylenediamine kapab tou itilize yo etidye mekanis nan entèraksyon ant dwòg ak selil timè, bay gwo sipò pou devlopman dwòg ak aplikasyon klinik.
5. Evalyasyon Biosafety
Dihydroethylene kapab tou itilize nan jaden an nan evalyasyon biosafety. Anba enfliyans polyan nan anviwònman an ak toksin, eta redox nan selil yo ka chanje. Pa detekte entansite a fluoresans nan dihydroethylenediamine, enpak la nan sibstans sa yo sou estati selilè redox ka evalye, kidonk evalye sekirite byolojik yo. Metòd sa a se yon gwo siyifikasyon pou evalye risk potansyèl polyan nan anviwònman an epi asire sante moun.
Etap detaye yo ak ekwasyon chimik korespondan pou sentèz la nandihydroethidiumNan laboratwa a se yon pwosesis ki enplike sentèz chimik òganik.
1. Preparasyon nan matyè premyè
Kòmanse Materyèl: Chwazi yon materyèl ki apwopriye pou kòmanse, ki ka yon konpoze ki gen yon bag benzèn ak yon gwoup amine.
Solvang ak katalis: Chwazi Solvang ki apwopriye (tankou etanòl, methanol, elatriye) ak katalis (tankou katalis metal tranzisyon) ki baze sou ki kalite reyaksyon.
2. Premye etap reyaksyon: Entwodiksyon ak modifikasyon nan bag benzèn
Kalite reyaksyon: reyaksyon sibstitisyon oswa reyaksyon kouti nan idrokarbur aromat.
Etap espesifik: Anba aksyon an nan yon katalis, se materyèl la kòmanse te reyaji ak bag ki apwopriye benzèn entwodwi réactifs (tankou asid phenylboronic, halogenated benzèn, elatriye) prezante yon estrikti bag benzèn.
Ekwasyon chimik: Akòz estrikti a enkoni nan reactants espesifik ak pwodwi yo, se fòmil la jeneral yo itilize isit la yo reprezante:
Kòmanse materyèl+benzèn bag entwodiksyon reyaktif → pwodwi entèmedyè 1
3. Dezyèm etap reyaksyon: Entwodiksyon oswa modifikasyon nan gwoup amine
Kalite reyaksyon: reyaksyon amination oswa reyaksyon sibstitisyon amine.
Etap espesifik: Anba kondisyon ki apwopriye, reyaji entèmedyè pwodwi 1 ak reyaktif amination (tankou amin, azid, elatriye) prezante oswa modifye gwoup amine.
Ekwasyon chimik:
Entèmedyè pwodwi 1+ Amination reyaktif → Entèmedyè pwodwi 2
4. Reyaksyon Twazyèm Etap: Reyaksyon Idrogenasyon
Kalite reyaksyon: reyaksyon idrogenasyon.
Etap espesifik: Anba aksyon an nan katalis (tankou Platinum, Paladyòm, elatriye) ak gaz idwojèn, pwodwi a entèmedyè 2 idrogenate jwenn dihydroethylene lengot oswa analogue li yo.
Ekwasyon chimik:
Entèmedyè pwodwi 2+ H2 → Dihydroethylene lengot (oswa menm jan an)
5. pirifye ak karakterizasyon
Pou pirifye: pirifye pwodwi a nan metòd tankou rkristalizasyon ak kromatografi kolòn.
Karakterizasyon: Sèvi ak teknik tankou spectrometry mas, enfrawouj spèktroskopi, ak nikleyè mayetik sonorite karakterize pwodwi a ak konfime estrikti li yo ak pite.
Dihydroethidium(DHE) se yon sonde fliyoresan lajman itilize nan rechèch byolojik. Pwopriyete inik fluoresans li yo bay li avantaj enpòtan nan detekte espès intracellular oksijèn reyaktif (espesyalman anyon superoksid). Sa ki anba la a se yon entwodiksyon detaye sou pwopriyete yo fluoresans nan ethylene dihydrogen lengote:
Dihydroethylene tèt li se yon konpoze ki pa fliyoresan, men lè li antre nan selil yo, li kapab oksidasyon pa anyon entranki superoksid (O ₂ ⁻), kidonk konvèti nan ethylene. Glycol ethylene se yon konpoze fliyoresan ki ka mare nan ADN ak RNA. Se poutèt sa, lè dihydroethylene glycol se soksid nan glycol ethylene, li pral mare nan asid nikleyik nan selil yo ak emèt fò fluoresans wouj.
Gen yon chanjman enpòtan nan karakteristik sa yo fluoresans espèk nan lengote dihydroethyl anvan ak apre oksidasyon. Lè yo pa soksid, dihydroethyl lockot nan tèt li pa emèt fluoresans. Lè li se soksid nan oksid etilèn, longèdonn eksitasyon maksimòm li yo se nòmalman alantou 488Nm oswa 530Nm, ak longèdonn maksimòm emisyon li yo se alantou 610nm. Sa fè li konpatib ak sistèm yo filtre nan mikwoskòp fluoresans komen oswa sitomè koule, fasilite D 'fluoresans ak analiz quantitative.
Entansite a fluoresans nan silfat dihydroethyl pozitivman Koehle ak nivo nan anyon entranki superoksid. Lè konsantrasyon an nan anyon superoksid intracellular ogmante, se plis dihydroethylenediamine se soksid nan ethylenediamine, ki mare nan asid nikleyik ak emèt pi fò siyal fluoresans. Se poutèt sa, pa detekte entansite a fluoresans nan dihydroethylenediamin, nivo nan anyon entranki superoksid ka endirèkteman reflete.
Konplèks la fliyoresan ki te fòme pa konbinezon an nan glycol dihydroethylene ak asid nikleyik gen gwo estabilite ak se pa fasil blanchi oswa enzymatically idrolize. Sa rezilta nan bon estabilite fluoresans nan glycol dihydroethylene nan long - tèm D 'oswa eksperyans kontinyèl siveyans, ki se benefis pou evalye avèk presizyon chanjman yo dinamik nan anyon superoksid entranglè.
Pa itilize pwopriyete yo fluoresans nan ethylenediamine, chèchè ka itilize teknik D 'tankou mikroskopi fluoresans oswa sitometri koule kontwole ak analize nivo yo nan anyon entranki superoksèl nan reyèl - tan. Metòd sa a gen avantaj ki genyen nan segondè sansiblite, espesifik, ak segondè - debi, bay yon zouti pwisan pou revele fòmil yo nan espès oksijèn reyaktif nan fizyoloji selilè ak patoloji.
Dihydroethidium (dihydroethidium, DHE) se vre yon selil - pèmeyab ble fliyoresan ki se sitou itilize yo detekte superoksid anyon radikal (O2-) nan selil yo. Sa ki anba la a se prensip la nan deteksyon li yo ak ka aplikasyon li yo nan rechèch byolojik:
Prensip deteksyon
DHE ka dezidrogenated pa anyon entranki superoksid yo pwodwi etidyom (egzanp, bromid etidyom) apre yo te vale pa selil k ap viv. Elilidyòm ka mare nan RNA oswa ADN yo pwodwi wouj fluoresans. Lè nivo a anyon superoksid intracellular se pi wo, se plis etidyom pwodwi ak fluoresans wouj la se pi fò; Kontrèman, li se pi fèb. Sa a pèmèt deteksyon an nan nivo anyon superoksid ak DHE. An menm tan an, DHE tèt li fluoresces ble nan sitoplas la jiskaske li se soksid, ak Lè sa a, li pral eleman nan ADN nan selilè, tach nwayo a yon wouj klere fliyoresan.
Egzanp Aplikasyon
Deteksyon pwodiksyon ROS nan tisi fwa: seksyon tisi fwa yo prepare ak enkubasyon ak DHE. Seksyon yo Lè sa a, yo obsève lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fluoresans ak pousantaj la nan DHE - se selil pozitif kalkile pa analiz quantitative morfometrik evalye ROS (reyaktif espès oksijèn) pwodiksyon an.
Pou eksplore chanjman ki fèt nan anzim antioksidan ak glutathione estati redox nan CD 34+ selil ki nan eta ipoksik ak normoks: nan etid sa a, superoksid O2 - te make lè l sèvi avèk DHE ak Lè sa a, assayed pa moute-koule. Rezilta yo te montre ke kontni an oksijèn te gen yon efè sou jenerasyon an nan superoksid ak oksijene, ak yon pousantaj ki pi wo nan jenerasyon oksijene nan eta a normoksik.
Prensip ki anwo yo ak ka aplikasyon yo montre ke DHE, kòm yon superoksid anyon fliyoresan pwofonde, gen nan yon pakèt domèn aplikasyon pou nan jaden an nan rechèch byolojik. Li pa ka itilize sèlman pou evalye nivo estrès oksidatif nan selil yo, men tou bay yon baz enpòtan pou mekanis maladi ak devlopman dwòg antioksidan.
Frontiers nan rechèch
► Design nan radyo -aktif - sond ki make
Pou pèmèt nan vivo swiv dinamik nan superoksid, chèchè devlope yon ¹c - ki make DHE derive. Pa minimize modifikasyon estriktirèl (entwodwi yon atòm brom sèlman nan bag la benzèn), pwodui chimik yo ak pwopriyete byolojik nan DHE yo te konsève. PET D 'revele ke sa a sondaj ekspoze quadruple pi wo absorption nan ischemic myokard konpare ak tisi ki an sante, ki montre siyifikatif korelasyon ak DHE entansite fluoresans (R =0.92, P<0.001), thereby providing a novel tool for early diagnosis of cardiovascular diseases.
► Devlopman mitokondri - sond vize
Pou adrese bezwen an pou deteksyon mitokondriyo superoksid, chèchè sentetiz wouj mitosox (yon mitokondri - analòg lokalize nan DHE). Sonde sa a vize mitokondri atravè yon moso triphenylphosphine, ak pwodwi oksidasyon li yo ki emèt zoranj - fluoresans wouj (510/580 nm). Nan modèl maladi Parkinson la, mitosox deteksyon wouj revele ke konsantrasyon mitokondriyo superoksid nan substantia nigra newòn dopaminergic yo te elve senk fwa konpare ak nivo nòmal, parèt pi bonè pase mak apoptotic. Sa a bay yon biomarqueur pou entèvansyon bonè nan maladi neurodégénératives.
Baj popilè: Dihydroethidium CAS 104821-25-2, Swèd, manifaktirè, faktori, en, achte, pri, esansyèl, pou vann